Cromatografia Liquida (LC) – Cromatografia Liquida ad Alta Prestazione (HPLC, Cromatografia Ionica (IC) e la Cromatografia Liquida e Spettrometria di Massa (LC-MS)
cromatografia Liquida è uno dei più potenti strumenti analitici di laboratorio. È molto usato per la separazione e l’analisi di miscele di composti di tutti i tipi. Quando combinato con la sensibilità e la selettività della spettrometria di massa, il suo potere è notevolmente migliorato.
Come funzionano la cromatografia liquida ad alte prestazioni, la cromatografia ionica e la cromatografia liquida con spettrometria di massa?
Nella cromatografia liquida un liquido (fase mobile/eluente) ad alta pressione scorre attraverso un tubo inerte (colonna) imballato con una polvere fine che può essere rivestita in un liquido (fase stazionaria). Un campione viene iniettato nell’eluente prima della colonna; mentre si muove attraverso la colonna, il tempo impiegato da ciascun composto nel campione per raggiungere la fine della colonna è governato dalla sua interazione con l’eluente e la fase stazionaria. Questo dipende dalle proprietà del composto e può essere utilizzato per separare miscele di composti molto simili. Una volta separati, i composti possono essere misurati mentre emergono dalla colonna da una serie di rivelatori, sia non selettivi che selettivi, inclusi gli spettrometri di massa.
Diversi materiali di imballaggio supportano diversi meccanismi di separazione: fase normale, fase inversa, esclusione di dimensioni, scambio ionico, affinità, interazione chirale o idrofila HPLC. La LC in fase normale utilizza una fase stazionaria polare e un eluente meno polare o non polare. Nella LC in fase inversa queste polarità sono invertite.
Come funziona la cromatografia ionica?
La cromatografia ionica (IC) è una variante dell’HPLC in cui l’interazione in fase stazionaria si basa sullo scambio ionico. Viene quindi applicato a ioni separati o specie cariche. Anioni e cationi sono separati su colonne separate. A differenza di HPLC dove gran parte del focus è sulla separazione composti simili, in IC le separazioni tendono ad essere standard e l’enfasi è sulla precisione e sensibilità. A causa delle diverse proprietà degli ioni, vengono spesso utilizzati rivelatori di conduttività; per migliorare la sensibilità, la conduttività di fondo dell’eluente viene rimossa prima del rilevamento degli ioni. Per ottenere una sensibilità molto più elevata, gli ioni possono essere preconcentrati su una breve colonna di scambio ionico e quindi eluiti nel flusso eluente per la separazione. Questo offre un modo molto efficace per determinare i livelli di traccia di molti anioni. IC è spesso usato per integrare la determinazione ICP-MS dei metalli in un campione.
A cosa serve la cromatografia liquida (LC)?
La cromatografia liquida comprende di gran lunga la gamma più comune di tecniche utilizzate per determinare uno o più componenti in una miscela. Con un’adeguata scelta di fase eluente e stazionaria tutti i tipi di composti in soluzione possono essere separati. HPLC è utilizzato per la separazione ad alta pressione di miscele di composti organici. IC consente la determinazione di anioni e cationi e altre specie cariche.. LC-MS ha il vantaggio di poter fornire un rilevamento selettivo dei componenti, riducendo la necessità di separare completamente i componenti cromatograficamente. Può anche fornire informazioni extra sul peso strutturale e molecolare per aiutare l’identificazione.
Perché usare la cromatografia liquida (LC)?
Cromatoraphy liquido ad alte prestazioni (HPLC)
HPLC è la tecnica di scelta quando si analizzano materiali per una gamma più ampia possibile di composti organici. I composti volatili (COV e SVOC) sono generalmente analizzati meglio da GC o GC-MS, ma l’HPLC è applicabile a una varietà molto maggiore di miscele, comprese le molecole non volatili o termicamente instabili. I suoi vantaggi includono versatilità, sensibilità e applicabilità a miscele molto complesse.
Cromatografia ionica (IC)
IC è una variante su HPLC in cui la fase stazionaria è resina a scambio ionico. Ciò consente la separazione di componenti ionici e carichi ed è comunemente usato per determinare cationi e soprattutto anioni in campioni acquosi. È facile da quantificare e, con tecniche di pre-concentrazione, può raggiungere una sensibilità molto elevata.
Cromatografia liquida con spettrometria di massa (LC-MS)
LC-MS offre alta sensibilità e selettività. È la tecnica di scelta per l’analisi di miscele complesse di composti sia per l’identificazione di incognite che per ottenere dati quantitativi su tracce / componenti minori. La combinazione di LC e MS fornisce una grande quantità di informazioni per aiutare l’identificazione dei composti.
Tipi di cromatografia liquida (LC)
La versatilità della cromatografia liquida ha portato a una vasta gamma di strumentazione per diverse applicazioni. Praticamente tutti LC viene effettuata sotto pressione molto elevata necessaria per pompare la fase mobile attraverso le perle fini nel letto imballato. UHPLC utilizza perle più fini e funziona a pressioni ancora più elevate.
C’è una vasta gamma di rivelatori differenti disponibili. MS è il più potente e flessibile; molti rivelatori MS sono unità quadrupole a bassa risoluzione, ma gli spettrometri di massa ad alta risoluzione offrono la possibilità di identificazioni inequivocabili. I rivelatori ampiamente utilizzati includono spettrofotometri per la maggior parte delle applicazioni ad alta sensibilità e conduttività elettrica per IC.
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