Cromatografía Líquida (LC): Cromatografía Líquida de alto rendimiento (HPLC), Cromatografía Iónica (IC) y Cromatografía Líquida con Espectrometría de Masas (LC – MS)
La cromatografía líquida es una de las herramientas más potentes del laboratorio analítico. Es muy utilizado para la separación y análisis de mezclas de compuestos de todo tipo. Cuando se combina con la sensibilidad y selectividad de la espectrometría de masas, su potencia aumenta en gran medida.
¿Cómo funciona la Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento, la Cromatografía Iónica y la Cromatografía Líquida con Espectrometría de Masas?
En la cromatografía líquida, un líquido (la fase móvil/eluyente) fluye a alta presión a través de un tubo inerte (columna) embalado con un polvo fino que puede recubrirse en un líquido (fase estacionaria). Se inyecta una muestra en el eluyente antes de la columna; a medida que se mueve a través de la columna, el tiempo que tarda cada compuesto de la muestra en llegar al final de la columna se rige por su interacción con el eluyente y la fase estacionaria. Esto depende de las propiedades del compuesto y se puede usar para separar mezclas de compuestos muy similares. Una vez separados, los compuestos pueden medirse a medida que emergen de la columna mediante una serie de detectores, tanto no selectivos como selectivos, incluidos espectrómetros de masas.
Diferentes materiales de embalaje admiten diferentes mecanismos de separación: fase normal, fase inversa, exclusión de tamaño, intercambio iónico, afinidad, interacción quiral o hidrofílica HPLC. La LC de fase normal utiliza una fase estacionaria polar y un eluyente menos polar o no polar. En la fase inversa LC, estas polaridades se invierten.
¿Cómo funciona la Cromatografía iónica?
La cromatografía iónica (IC) es una variante de la CLAR en la que la interacción de fase estacionaria se basa en el intercambio iónico. Por lo tanto, se aplica a iones separados o especies cargadas. Los aniones y cationes están separados en columnas separadas. A diferencia de la HPLC, donde gran parte del enfoque está en la separación de compuestos similares, en IC las separaciones tienden a ser estándar y el énfasis está en la precisión y la sensibilidad. Debido a las diferentes propiedades de los iones, los detectores de conductividad se utilizan a menudo; para mejorar la sensibilidad, se elimina la conductividad de fondo del eluyente antes de la detección de los iones. Para lograr una sensibilidad mucho mayor, los iones pueden ser preconcentrados en una columna corta de intercambio iónico y luego eluidos en la corriente de eluyentes para su separación. Esto ofrece una forma muy efectiva de determinar los niveles de trazas de muchos aniones. El CI se utiliza a menudo para complementar la determinación ICP-MS de metales en una muestra.
¿Para qué sirve la cromatografía líquida (LC)?
La cromatografía líquida incluye, con mucho, la gama más común de técnicas utilizadas para determinar uno o varios componentes de una mezcla. Mediante la elección adecuada de fase elusiva y estacionaria, se pueden separar todos los tipos de compuestos en solución. La HPLC se utiliza para la separación a alta presión de mezclas de compuestos orgánicos. IC permite la determinación de aniones y cationes y otras especies cargadas.. LC-MS tiene la ventaja de que puede proporcionar detección selectiva de componentes, reduciendo la necesidad de separar completamente los componentes cromatográficamente. También puede proporcionar información extra estructural y de peso molecular para ayudar a la identificación.
¿Por qué utilizaría Cromatografía líquida (LC)?
Cromatafía líquida de alto rendimiento (HPLC)
La HPLC es la técnica de elección cuando se analizan materiales para una gama lo más amplia posible de compuestos orgánicos. Los compuestos volátiles (CoV y SVOC) suelen analizarse mejor mediante GC o GC-MS, pero la HPLC es aplicable a una variedad mucho mayor de mezclas, incluidas moléculas no volátiles o térmicamente inestables. Sus ventajas incluyen versatilidad, sensibilidad y aplicabilidad a mezclas muy complejas.
Cromatografía iónica (IC)
IC es una variante de HPLC en la que la fase estacionaria es resina de intercambio iónico. Esto permite la separación de componentes iónicos y cargados y se usa comúnmente para determinar cationes y especialmente aniones en muestras acuosas. Es fácil de cuantificar y, con técnicas de pre-concentración, puede lograr una sensibilidad muy alta.
La cromatografía líquida con espectrometría de masas (LC-MS)
La LC-MS ofrece una alta sensibilidad y selectividad. Es la técnica de elección para el análisis de mezclas complejas de compuestos, tanto para la identificación de incógnitas como para obtener datos cuantitativos sobre componentes traza / menores. La combinación de LC y MS proporciona una gran cantidad de información para ayudar a la identificación de compuestos.
Tipos de Cromatografía líquida (LC)
La versatilidad de la cromatografía líquida ha dado lugar a una amplia gama de instrumentos para diferentes aplicaciones. Prácticamente todo el LC se lleva a cabo bajo la presión muy alta requerida para bombear la fase móvil a través de las finas perlas en la cama empacada. UHPLC utiliza perlas más finas y funciona a presiones aún más altas.
Hay una amplia gama de detectores disponibles. El MS es el más potente y flexible; muchos detectores MS son unidades cuadrupolares de baja resolución, pero los espectrómetros de masas de alta resolución ofrecen el alcance para identificaciones inequívocas. Los detectores ampliamente utilizados incluyen espectrofotómetros para la mayoría de las aplicaciones de alta sensibilidad y conductividad eléctrica para CI.
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