Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). El PDA se recomienda para el aislamiento y la enumeración de hongos (levaduras y mohos) del agua, los productos lácteos, otros productos alimenticios e incluso muestras clínicas ( restos de piel). La infusión de patata, una base nutritiva rica, fomenta la esporulación de moho y la producción de pigmentos en algunos dermatofitos (por ejemplo, Trichophyton rubrum).
Principio del Agar de dextrosa de Patata (PDA)
El agar de dextrosa de patata (PDA) contiene infusiones de patata deshidratadas y Dextrosa. La infusión de patata proporciona una base nutritiva para el crecimiento exuberante de la mayoría de los hongos, mientras que la dextrosa sirve como estimulante del crecimiento. El agar en el medio actúa como agente solidificador. El PDA ha modificado aún más la incorporación de agentes como el ácido tartárico, el cloranfenicol y la clortetraciclina. La incorporación de ácido tartárico (TA) en el medio reduce el pH a 3,5, lo que inhibe el crecimiento bacteriano. El cloranfenicol actúa como un agente selectivo para inhibir el crecimiento excesivo de bacterias de microorganismos competidores de especímenes mixtos, al tiempo que permite el aislamiento selectivo de hongos. La aplicación de clortetraciclina en PDA es para la evaluación de levadura y moho de productos cosméticos.
Composición del Agar de dextrosa de patata (PDA)
Los ingredientes del agar de dextrosa de patata ( PDA) y sus cantidades son las siguientes:
Ingredientes Gms / Litro
- Patatas, infusión de: 200.0
- Dextrosa: 20.0
- Agar: 15,0
- Agua destilada(P/P): 1000 ml
Ph final ( a 25°C) 5.6±0.2
Preparación de Agar de Dextrosa de Patata ( PDA)
- Suspender 39,0 gramos de agar de dextrosa de patata (PDA) en 1 litro de agua purificada/destilada o desionizada.
- Calentar a ebullición para disolver completamente el medio.
- Esterilice mediante autoclave a 15 libras de presión (121°C) durante 15 minutos.
- Después del autoclave, dejar enfriar a 45-50°C.
- Nota: En trabajos específicos, cuando se requiere pH 3,5, acidificar el medio con ácido tartárico estéril al 10%. La cantidad de ácido necesaria para 100 ml de medio estéril enfriado es de aproximadamente 1 ml, y no vuelva a calentar el medio después de agregar el ácido.
- Mezclar bien antes de dispensar.
- Vierta el Agar de dextrosa de patata en cada plato y deje las placas en la superficie estéril hasta que el agar se haya solidificado.
- Almacene los platos en un refrigerador a 2-8°C.
Almacenamiento y vida útil del Agar de Dextrosa de Patata ( PDA)
- Conservar a 2-8ºC y lejos de la luz directa.
- Los medios no deben utilizarse si hay signos de deterioro (encogimiento, agrietamiento o decoloración), contaminación.
- El producto es sensible a la luz y la temperatura; protege de la luz, el calor excesivo, la humedad y la congelación.
Requisitos de prueba
- Muestras de prueba ( muestras o crecimiento de hongos)
- Bucle de inoculación
- Quemador Bunsen
- Incubadora
- Cepas de control (Candida albicans ATCC ® 10231 y Trichophyton rubrum
ATCC ® 28188)
Procedimiento de ensayo (inoculación de muestras / organismos)
- Deje que las placas se calienten a 37 ° C o a temperatura ambiente, y que la superficie de agar se seque antes de inocular.
- Tome dos placas para una muestra.
- Inocule y raye el espécimen tan pronto como sea posible después de la recolección.
- Si el espécimen que se va a cultivar está en un hisopo, enrolle el hisopo sobre una pequeña área de la superficie de agar.
- Raya para aislamiento con un bucle estéril.
- Incubar una placa aeróbicamente a temperatura ambiente ( 20-25ºC) mientras que otra placa de 35-37ºC hasta 4 semanas ( dependiendo del tipo de organismo sospechoso)
- Examinar las características de la colonia.
Interpretación de resultados de PDA
- Cepas control, es decir, Candida albicans ATCC ® 10231 (cultivador rápido) y Trichophyton rubrum ( cultivador lento) ATCC ® 28188): Presencia de crecimiento
- Presencia de hongos en espécimen: Presencia de crecimiento en PDA
Características de colonia de varios organismos en PDA
Candida albicans: Crecimiento; colonias blancas lisas después de 24-48 horas
Trichophyton rubrum: Crecimiento visto en 7 días y puede tomar 3-4 semanas para que el color rojo en el reverso de la colonia sea visible.
Modificación de PDA
- Agar de dextrosa de patata con TA (Ácido tartárico): Se utiliza para el examen microbiano de alimentos y productos lácteos.
- Agar de dextrosa de patata con Clortetraciclina: Se utiliza para la enumeración microbiana de levadura y moho de cosméticos.
- Agar de Dextrosa de patata con Cloranfenicol: Se utiliza para el cultivo selectivo de hongos a partir de muestras mixtas.
Usos del Agar Dextrosa de Patata ( PDA)
- El PDA se utiliza para la detección de hongos en productos lácteos, alimentos preparados y muestras de agua.
- También se utiliza para el cultivo de hongos (levaduras y mohos) a partir de muestras clínicas.
- Este medio también es aplicable para la expresión de pigmentos y la esporulación.
- Varios PDA modificados y sus aplicaciones son las siguientes: PDA con TA utilizado para el examen microbiano de alimentos y productos lácteos, mientras que PDA con clortetraciclina se utiliza para la enumeración microbiana de levadura y moho de cosméticos. PDA con usos de cloranfenicol para el cultivo selectivo de hongos a partir de muestras mixtas.
Se deben evitar las conferencias magistrales sobre PDA
- Calentar el medio después de la acidificación (incorporación de ácido tartárico), ya que puede hidrolizar el agar, lo que puede hacer que el agar no se solidifique.
- 4,0 g de extracto de patata equivale a 200 g de infusión de patata.
- El agar de dextrosa de patata original no solo apoya el crecimiento de hongos, sino también algunas bacterias ácidas y, por lo tanto, se prefieren sus modificaciones.
- La cantidad de clortetraciclina 40,0 mg, cloranfenicol 25,0 mg y ácido tartárico 1.4 gm se pueden usar en 1000 ml de PDA en formas modificadas adicionalmente.
Más lecturas en PDA
- Micología médica. Editores: Emmons y Binford, 2ª ed 1970, Editorial Lea y Febiger, Filadelfia.
- Rippon’s JW: Microbiología médica. Los hongos patógenos y los Actinomicetos patógenos. 3a ed 1988 Editor WB Saunder co, Filadelfia.
- Manual de Procedimientos de Microbiología Clínica, Jefe de redacción H. D. Isenberg, Facultad de Medicina Albert Einstein, Nueva York, Editorial ASM (Sociedad Americana de Microbiología), Washington DC.
- Un Libro de Texto de Micología Médica. Editor: Jagdish Chander. Publicación Mehata, India.
- Micología Práctica de Laboratorio. Editores: Koneman E. W. y G. D. Roberts, 3a ed 1985, Editor Williams y Wilkins, Baltimore.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar