Chromatographie Liquide (LC) – Chromatographie Liquide Haute Performance (CLHP), Chromatographie Ionique (IC) et Chromatographie Liquide avec Spectrométrie de masse (LC-MS)
La chromatographie liquide est l’un des outils les plus puissants du laboratoire d’analyse. Il est très largement utilisé pour la séparation et l’analyse de mélanges de composés de tous types. Lorsqu’il est combiné à la sensibilité et à la sélectivité de la spectrométrie de masse, sa puissance est considérablement améliorée.
Comment fonctionnent la Chromatographie Liquide à Haute Performance, la Chromatographie Ionique et la Chromatographie Liquide avec Spectrométrie de masse?
En chromatographie liquide, un liquide (la phase mobile/éluant) sous haute pression s’écoule à travers un tube inerte (colonne) emballé avec une poudre fine qui peut être enrobée dans un liquide (phase stationnaire). Un échantillon est injecté dans l’éluant avant la colonne; au fur et à mesure qu’il se déplace dans la colonne, le temps mis par chaque composé de l’échantillon pour atteindre la fin de la colonne est régi par son interaction avec l’éluant et la phase stationnaire. Cela dépend des propriétés du composé et peut être utilisé pour séparer des mélanges de composés très similaires. Une fois séparés, les composés peuvent être mesurés à leur sortie de la colonne par une gamme de détecteurs, non sélectifs et sélectifs, y compris des spectromètres de masse.
Différents matériaux d’emballage supportent différents mécanismes de séparation – phase normale, phase inversée, exclusion de taille, échange d’ions, affinité, interaction chirale ou hydrophile HPLC. La LC en phase normale utilise une phase stationnaire polaire et un éluant moins polaire ou non polaire. En phase inverse LC, ces polarités sont inversées.
Comment fonctionne la chromatographie ionique?
La chromatographie ionique (CI) est une variante de la CLHP où l’interaction en phase stationnaire est basée sur l’échange d’ions. Il est donc appliqué à des ions séparés ou à des espèces chargées. Les anions et les cations sont séparés sur des colonnes séparées. Contrairement à la CLHP où une grande partie de l’accent est mis sur la séparation de composés similaires, dans la CI, les séparations ont tendance à être standard et l’accent est mis sur la précision et la sensibilité. En raison des différentes propriétés des ions, des détecteurs de conductivité sont souvent utilisés; pour améliorer la sensibilité, la conductivité de fond de l’éluant est éliminée avant la détection des ions. Pour obtenir une sensibilité beaucoup plus élevée, les ions peuvent être préconcentrés sur une courte colonne d’échange d’ions, puis élués dans le flux d’éluant pour la séparation. Cela offre un moyen très efficace de déterminer les niveaux de traces de nombreux anions. IC est souvent utilisé pour compléter la détermination ICP-MS des métaux dans un échantillon.
À quoi sert la chromatographie liquide (LC)?
La chromatographie en phase liquide comprend de loin la gamme la plus courante de techniques utilisées pour déterminer un ou plusieurs composants dans un mélange. Par un choix approprié d’éluant et de phase stationnaire, tous les types de composés en solution peuvent être séparés. La CLHP est utilisée pour la séparation à haute pression de mélanges de composés organiques. IC permet la détermination des anions et des cations et d’autres espèces chargées.. LC-MS a l’avantage de pouvoir fournir une détection sélective des composants, réduisant ainsi la nécessité de séparer complètement les composants chromatographiquement. Il peut également fournir des informations supplémentaires sur la structure et le poids moléculaire pour faciliter l’identification.
Pourquoi utiliseriez-vous la chromatographie liquide (LC)?
Chromatoraphie liquide Haute performance (CLHP)
La CLHP est la technique de choix lors de l’analyse de matériaux pour une gamme aussi large que possible de composés organiques. Les composés volatils (COV et COV) sont généralement mieux analysés par GC ou GC-MS, mais la CLHP est applicable à une plus grande variété de mélanges, y compris des molécules non volatiles ou thermiquement instables. Ses avantages incluent la polyvalence, la sensibilité et l’applicabilité à des mélanges très complexes.
Chromatographie ionique (CI)
IC est une variante de la CLHP dans laquelle la phase stationnaire est une résine échangeuse d’ions. Ceci permet la séparation des composants ioniques et chargés et il est couramment utilisé pour déterminer les cations et en particulier les anions dans les échantillons aqueux. Il est facile à quantifier et, avec des techniques de pré-concentration, peut atteindre une sensibilité très élevée.
Chromatographie liquide avec spectrométrie de masse (LC-MS)
La LC-MS offre une sensibilité et une sélectivité élevées. C’est la technique de choix pour l’analyse de mélanges complexes de composés à la fois pour l’identification d’inconnues et pour obtenir des données quantitatives sur des composants traces / mineurs. La combinaison de LC et de MS fournit de nombreuses informations pour aider à l’identification des composés.
Types de chromatographie liquide (LC)
La polyvalence de la chromatographie liquide a conduit à une large gamme d’instrumentation pour différentes applications. La quasi-totalité des LC est réalisée sous la très haute pression nécessaire pour pomper la phase mobile à travers les fines billes du lit tassé. UHPLC utilise des billes plus fines et fonctionne à des pressions encore plus élevées.
Il existe une large gamme de détecteurs différents. La MS est la plus puissante et la plus flexible; de nombreux détecteurs MS sont des unités quadripolaires à basse résolution, mais les spectromètres de masse à haute résolution offrent la possibilité d’identifier sans ambiguïté. Les détecteurs largement utilisés comprennent des spectrophotomètres pour la plupart des applications à haute sensibilité et une conductivité électrique pour les circuits intégrés.
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