Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). Le PDA est recommandé pour l’isolement et le dénombrement des champignons (levures et moisissures) de l’eau, des produits laitiers, d’autres produits alimentaires et même des échantillons cliniques (restes de peau). La base nutritionnellement riche, l’infusion de pomme de terre favorise la sporulation des moisissures et la production de pigments chez certains dermatophytes (par exemple Trichophyton rubrum).
Principe de la gélose au dextrose de pomme de terre (PDA)
La gélose au dextrose de pomme de terre (PDA) contient des infusions de pommes de terre déshydratées et du dextrose. L’infusion de pomme de terre fournit une base nutritive pour la croissance luxuriante de la plupart des champignons, tandis que le dextrose sert de stimulant de croissance. La gélose dans le milieu agit comme agent solidifiant. Le PDA a en outre modifié des agents incorporants tels que l’acide tartrique, le chloramphénicol et la chlortétracycline. L’incorporation d’acide tartrique (TA) dans le milieu abaisse le pH à 3,5 ce qui inhibe la croissance bactérienne. Le chloramphénicol agit comme un agent sélectif pour inhiber la prolifération bactérienne de microorganismes concurrents provenant de spécimens mélangés tout en permettant l’isolement sélectif des champignons. L’application de la chlortétracycline dans le PDA est pour l’évaluation de la levure et de la moisissure provenant de produits cosmétiques.
Composition de la Gélose Dextrose de pomme de terre (PDA)
Gélose dextrose de pomme de terre (PDA) Les ingrédients et leurs quantités sont les suivants –
Ingrédients Gms / Litre
- Pommes de terre, infusion de: 200,0
- Dextrose: 20,0
- Gélose : 15,0
- Eau distillée (J/P) : 1000 ml
pH final (à 25°C) 5.6±0.2
Préparation de la Gélose Dextrose de Pomme de terre (PDA)
- Suspendre 39,0 grammes de gélose de dextrose de pomme de terre (PDA) dans 1 litre d’eau purifiée / distillée ou désionisée.
- Chauffer à ébullition pour dissoudre complètement le milieu.
- Stériliser par autoclavage à une pression de 121 °C (15 lb) pendant 15 minutes.
- Après autoclavage, laisser refroidir à 45-50 ° C.
- Remarque: Dans un travail spécifique, lorsque pH 3,5 est requis, acidifier le milieu avec de l’acide tartrique stérile à 10%. La quantité d’acide nécessaire pour 100 ml de milieu stérile refroidi est d’environ 1 ml, et ne pas chauffer à nouveau le milieu après l’ajout de l’acide.
- Bien mélanger avant la distribution.
- Verser la gélose de dextrose de pomme de terre dans chaque plaque et laisser les plaques sur la surface stérile jusqu’à ce que la gélose se soit solidifiée.
- Conserver les assiettes au réfrigérateur à 2-8°C.
Conservation et durée de conservation de la Gélose Dextrose de pomme de terre (PDA)
- Conserver à une température de 2 à 8ºC et à l’abri de la lumière directe.
- Les milieux ne doivent pas être utilisés en cas de signes de détérioration (rétrécissement, fissuration ou décoloration), de contamination.
- Le produit est léger et sensible à la température; protège de la lumière, de la chaleur excessive, de l’humidité et du gel.
Exigences d’essai
- Échantillons d’essai (échantillons ou croissance fongique)
- Boucle d’inoculation
- Brûleur de Bunsen
- Incubateur
- Souches témoins (Candida albicans ATCC ® 10231 et Trichophyton rubrum
ATCC ® 28188)
Procédure d’essai (inoculation de l’échantillon/de l’organisme)
- Laisser les plaques chauffer à 37 ° C ou à température ambiante, et la surface de la gélose sécher avant l’inoculation.
- Prenez deux plaques pour un spécimen.
- Inoculer et strier l’échantillon dès que possible après la collecte.
- Si l’échantillon à cultiver est sur un écouvillon, rouler l’écouvillon sur une petite surface de la gélose.
- Strie pour l’isolement avec une boucle stérile.
- Incuber une plaque de manière aérobie à température ambiante (20-25ºC) tandis qu’une autre de 35-37ºC jusqu’à 4 semaines (selon le type d’organismes suspectés)
- Examine les caractéristiques de la colonie.
Interprétation des résultats de PDA
- Souches témoins, c’est-à-dire Candida albicans ATCC ® 10231 (producteur rapide) et Trichophyton rubrum (producteur lent) ATCC ® 28188): Présence de croissance
- Présence de champignons dans le spécimen: Présence de croissance sur PDA
Caractéristiques des colonies de divers organismes dans PDA
Candida albicans: Croissance; colonies blanches lisses après 24 à 48 heures
Trichophyton rubrum: Croissance observée en 7 jours et il peut prendre 3 à 4 semaines pour que la couleur rouge du revers de la colonie soit visible.
Modification de PDA
- Gélose de Dextrose de pomme de terre avec de l’acide tartrique (TA): Elle est utilisée pour l’examen microbien des aliments et des produits laitiers.
- Gélose de dextrose de pomme de terre avec Chlortétracycline: Elle est utilisée pour le dénombrement microbien des levures et des moisissures provenant des cosmétiques.
- Gélose de Dextrose de pomme de terre au chloramphénicol: Elle est utilisée pour la culture sélective de champignons à partir d’échantillons mixtes.
Utilisations de la Gélose Dextrose de pomme de terre (PDA)
- Le PDA est utilisé pour la détection de champignons dans les produits laitiers, les aliments préparés ainsi que dans les échantillons d’eau.
- Il est également utilisé pour la culture de champignons (levures et moisissures) à partir d’échantillons cliniques.
- Ce milieu est également applicable à l’expression pigmentaire ainsi qu’à la sporulation.
- Divers PDA modifiés et leurs applications sont les suivants: PDA avec TA utilisé pour l’examen microbien des aliments et des produits laitiers tandis que les PDA avec chlortétracycline sont utilisés pour le dénombrement microbien des levures et des moisissures des cosmétiques. Le PDA au chloramphénicol est utilisé pour la culture sélective de champignons à partir d’échantillons mixtes.
Keynotes sur le PDA
- Le chauffage du milieu après acidification (incorporation d’acide tartrique) doit être évité car il peut hydrolyser la gélose, ce qui peut rendre la gélose incapable de se solidifier.
- 4,0 g d’extrait de pomme de terre équivaut à 200 g d’infusion de pomme de terre.
- La gélose dextrose de pomme de terre d’origine soutient non seulement la croissance des champignons, mais également certaines bactéries acides et ses modifications sont donc préférées.
- La quantité de chlortétracycline 40,0 mg, de chloramphénicol 25,0 mg et d’acide tartrique 1.4 gm peut également être utilisé dans 1000 ml de PDA sous des formes modifiées.
Lectures supplémentaires sur PDA
- Mycologie médicale. Editeurs: Emmons et Binford, 2e éd. 1970, Éditeur Lea et Febiger, Philadelphie.
- JW de Rippon: Microbiologie médicale. Les champignons pathogènes et les Actinomycètes pathogènes. 3e éd. 1988 Éditeur WB Saunder co, Philadelphie.
- Manuel de procédures de microbiologie clinique, rédacteur en chef H.D. Isenberg, Albert Einstein College of Medicine, New York, éditeur ASM (American Society for Microbiology), Washington DC.
- Un Livre-texte de Mycologie médicale. Éditeur: Jagdish Chander. Publication Mehata, Inde.
- Mycologie de Laboratoire pratique. Editeurs : Koneman E.W. et G.D. Roberts, 3e éd. 1985, Éditeur Williams et Wilkins, Baltimore.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar