기초 연구는 종종 고립 된 세포 집단에 대한 연구를 포함합니다. 연구자들이 세포 기능,신호 전달,유전자 발현,운명 결정 등에 대한 새로운 발견을 할 수있게 해주는 것은 이러한 풍부한 인구입니다. 표적 세포 집단의 급속하고 정확한 농축을 위한 기술은 중대한 관심사의 지역입니다. 셀 정렬 기술은 대량 정렬과 단일 셀 정렬의 두 가지 일반적인 범주로 나뉩니다. 대량 셀 정렬에서 모든 대상 셀은 한 번의 스윕으로 수집되는 반면 단일 셀 정렬에서 모든 셀은 개별적으로 분석됩니다. 벌크 셀 정렬에는 여과,원심 분리 및 자기 셀 정렬과 같은 여러 가지 방법이 있습니다. 주요 단일 세포 분류 방법은 유세포 분석 또는 형광 활성화 세포 분류입니다. 세포 분류는 매우 정확할 수 있지만 정렬 된 세포 집단이”순수”하다고 말하기는 어렵습니다. 대신 수집 된 인구를”농축”이라고합니다. 일반적으로 단일 세포 정렬은 벌크 정렬 방법을 통해 얻은 것보다 더 균질 한 고농축 세포 집단을 초래합니다.
원심 분리 및 여과
이러한 벌크 셀 분류 기술은 크기 및 밀도와 같은 셀 특성에 의존합니다. 여과는 표적 세포 보다는 더 작은,그러나 쓸모 없는 파편 보다는 더 큰 일관된 숨구멍 크기를 가진 막을 요구합니다. 다양한 기공 크기의 멤브레인을 선택할 수 있습니다. 원심 분리는 일반적으로 혈장,백혈구 및 적혈구로의 혈액 초기 분리에 사용됩니다. 밀도 구배 원심 분리는 백혈구 분획과 적혈구 분획 사이에 밀도를 갖는 물질을 첨가함으로써 분리 공정을 향상시킨다. 더 무겁거나 더 조밀 한 세포는 원심 분리 중에 바닥으로 떨어지고 덜 조밀 한 플라즈마는 맨 위에 남아 있습니다. 이러한 기술은 세포의 거친 분리에 유용합니다; 세포 표면 마커를 기반으로 특정 세포 유형을 풍부하게하기 위해보다 전문화 된 기술이 필요합니다.
자기 셀 정렬 기술
자기 셀 정렬은 매우 구체적 일 수있는 벌크 농축 기술이다. 초자성 나노 입자를 사용한 자기 정렬은 세포 농축 프로토콜에 높은 수준의 특이성을 도입합니다. 초자성 나노 입자는 산화철의 핵심으로 만들어지며,일반적으로 자철광(자철광)은 선천적으로 자성이 아니지만 적용된 자기장에 의해 자화됩니다. 이들 입자 또는 비드는 응집되는 것을 방지하기 위해 실리카 또는 중합체 표면으로 코팅되고,잘 선택된 코팅은 또한 작용기 및 항체의 공유 결합 부착을 위해 풍부한 표면을 제공한다. 항체의 부착은 초자성 입자에 특이성을 제공합니다. 기능화 된 입자는 표적 세포 용액으로 배양되고,항체에 상보적인 표면 항원을 가진 세포는 세포-비드 어원이 형성되도록 결합 할 것이다. 접합체는 자기 세포 분리에 의해 농축된다. 자기 셀 정렬은 특이성이 필요할 때 좋은 선택입니다. 여과,침전 및 원심 분리와 같은 다른 벌크 분류 방법은 그러한 특이성을 달성 할 수 없다. 자기 정렬은 신속하고 효율적입니다. 고급 생체 자기 분리 시스템은 표준 곡선과 정렬 프로세스의 광학 모니터링을 제공하여 정렬 정확도를 높일 수 있습니다. 게다가,진보된 별거 체계는 작업 양을 통하여 온화하고 일관된 자기력을 세포 생존 능력을 증가하기 위하여 제공하도록 설계됩니다.
유동 세포 계측 형광 기반 세포 분류
유동 세포 계측법에 의한 세포 분류는 각 세포를 개별적으로 분석한다. 이 한 번에 많은 양의 정보를 제공 할 수있는 매우 강력한 기술이다. 유세포 측정은 다중 면역 분석을위한 이상적인 정량화 방법입니다. 세포는 정렬 전에 형광 표지 된 항체로 배양됩니다. 항체는 표적 세포에 지상 항원에 특정적입니다. 각 항체는 다른 방출 파장을 가지며 고유하게 식별 할 수 있습니다. 형광체로 항체를 정확하게 라벨링하는 한 가지 방법은 단백질로 비드 라벨링하는 것입니다.
표지 된 항체로 배양 한 후,세포 용액은 유세포 계를 통해 보내진다. 이 기계는 한 번에 한 셀씩 미크론 크기의 노즐을 통해 솔루션을 안내합니다. 각 세포는 레이저 여기 영역을 통해 움직이며,여기서 레이저는 세포 표면에 결합 된 플루로 포어를 여기시킵니다. 형광 방출이 기록되고,셀은 사용자 정의 파라미터에 따라 수집 용기 또는 폐기 용기로 향한다. 한 번에 여러 세포 유형을 풍부하게 할 수 있으며 세포 수와 전체 인구의 백분율에 대한 정량적 정보가 동시에 기록됩니다.
유세포 계측법은 매우 유익한 방법이며 가장 정확한 세포 분류 기술이지만 매우 비쌉니다. 기계 자체는 종종 엄청나게 비싸고 훈련 된 운영자가 필요합니다. 많은 기관에는 그들의 기계의 사용을 위한 시간에 의하여 위탁하는 유세포 분석 연구 핵심 시설이 있고,이 비율은 또한 확실히 높을 수 있습니다. 이런 이유로 많은 실험실은 자석 분류 기술로 돌아가고 있습니다. 자기 분리는 정렬 전략을 개발하고 미세하게 조정하기 위해주의를 기울일 때 구체적이고 신속하며 효율적입니다.
셀 분류기 비용
셀 분류기는$100,000 바로 아래에서$250,000 이상으로 비용이들 수 있습니다. 가장 저렴한 셀 숏은 한 유형의 셀 마커에 최적화되어 하나의 레이저 만 포함합니다. 세포질”비바”는 세포질 표지 된 세포를 위해 전문화되어 있으며$90,000 미만에 판매됩니다. $100,000 와$160,000 사이의 범위에서 기계는 두 개의 레이저를 가지며 더 많은 색상을 감지합니다. 바이오 라드는 4 가지 색상을 감지 할 수있는 기계를 만들고,신도 전극은 최대 8 가지 색상을 감지합니다. $250,000 에 가까운 기계는 더 많은 레이저 및 지원하는 샘플 형식의 증가와 같은 기타 기능을 제공합니다. 제품의 범위는 더 많은 실험실에 액세스 할 수 있도록하기 위해 계속 증가하지만 그것은 여전히 사용하기 비싼 기술입니다. 더 많은 실험실은 이제 자기 분리를 고려합니다. 자석 분리기는$1000 에서$10000 의 범위에서 당신을 요할 것이다.
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