Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). PDA jest zalecany do izolacji i wyliczania grzybów (drożdży i pleśni) z wody, nabiału, innych produktów spożywczych, a nawet próbek klinicznych ( skrawki skóry). Bogata w składniki odżywcze baza, napar z ziemniaków zachęca do zarodkowania pleśni i produkcji pigmentów w niektórych dermatofitach (np. Trichophyton rubrum).
zasada agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA)
Agar dekstrozy ziemniaczanej (PDA) zawiera odwodnione napary ziemniaczane i dekstrozę. Napar z ziemniaków stanowi podstawę odżywczą dla bujnego wzrostu większości grzybów, podczas gdy dekstroza służy jako stymulator wzrostu. Agar w pożywce działa jako środek krzepnący. PDA zmodyfikował dodatkowo środki zawierające takie jak kwas winowy, chloramfenikol i chlortetracyklina. Wbudowanie kwasu winowego (TA) w pożywce obniża pH do 3,5, co hamuje wzrost bakterii. Chloramfenikol działa jako środek selektywny w celu zahamowania przerostu bakterii konkurencyjnych mikroorganizmów z mieszanych próbek, jednocześnie umożliwiając selektywną izolację grzybów. Zastosowanie chlortetracykliny w PDA służy do oceny drożdży i pleśni z produktów kosmetycznych.
skład agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA)
składniki agaru dekstrozy ziemniaczanej ( PDA) i ich ilości są następujące-
składniki Gms / litr
- ziemniaki, wlew z: 200,0
- dekstroza: 20,0
- agar: 15,0
- woda destylowana(d/w): 1000 ml
końcowe pH ( w 25°C) 5.6±0.2
przygotowanie agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA)
- Zawieś 39,0 gramów agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA) w 1 litrze wody oczyszczonej/destylowanej lub dejonizowanej.
- podgrzać do wrzenia, aby całkowicie rozpuścić podłoże.
- sterylizować w autoklawie pod ciśnieniem 15 funtów (121°C) przez 15 minut.
- po autoklawowaniu pozostaw do schłodzenia do 45-50°C.
- Uwaga: w specyficznej pracy, gdy wymagane jest pH 3,5, zakwasz podłoże sterylnym 10% kwasem winowym. Ilość kwasu wymagana dla 100 ml sterylnego, schłodzonego medium wynosi około 1 ml i nie należy ponownie podgrzewać medium po dodaniu kwasu.
- dobrze wymieszać przed dozowaniem.
- wlać Agar dekstrozy ziemniaczanej do każdej płytki i pozostawić płytki na sterylnej powierzchni, aż agar zestali się.
- przechowywać płytki w lodówce w temperaturze 2-8°C.
przechowywanie i okres przydatności do spożycia agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA)
- Przechowywać w temperaturze 2-8ºC, z dala od bezpośredniego światła.
- Media nie powinny być używane, jeśli występują jakiekolwiek oznaki pogorszenia (kurczenie się, pękanie lub odbarwienie), zanieczyszczenia.
- produkt jest wrażliwy na światło i temperaturę; chroni przed światłem, nadmiernym ciepłem, wilgocią i zamarzaniem.
wymagania testowe
- próbki testowe ( próbki lub wzrost grzybów)
- pętla szczepienia
- palnik Bunsena
- Inkubator
- szczepy kontrolne (Candida albicans ATCC ® 10231 i Trichophyton rubrum
szczepy kontrolne (Candida albicans ATCC ® 10231 i Trichophyton rubrum ATCC ® 28188)
procedura badania (szczepienie próbki / organizmu)
- pozostawić płytki do ogrzania w temperaturze 37°C lub do temperatury pokojowej, a powierzchnia agaru do wyschnięcia przed zaszczepieniem.
- weź dwie płytki na jedną próbkę.
- zaszczepić i posmarować okaz tak szybko, jak to możliwe po pobraniu.
- jeśli próbka, która ma być hodowana, znajduje się na waciku, przewróć wacik na małym obszarze powierzchni agaru.
- Smuga do izolacji sterylną pętlą.
- inkubować jedną płytkę tlenowo w temperaturze pokojowej ( 20-25ºC), podczas gdy inną 35-37ºC do 4 tygodni ( w zależności od rodzaju organizmów podejrzanych)
- badać cechy Kolonii.
interpretacja wyników PDA
- szczepów kontrolnych, tj. Candida albicans ATCC ® 10231 (szybki hodowca) i Trichophyton rubrum (powolny hodowca) ATCC ® 28188): Obecność wzrostu
- obecność grzybów w próbce: obecność wzrostu na PDA
charakterystyka Kolonii różnych organizmów w PDA
Candida albicans: wzrost; gładkie białe kolonie po 24-48 godzinach
Trichophyton rubrum: wzrost obserwowany w ciągu 7 dni i może potrwać 3-4 tygodnie, aby czerwony kolor na odwrotnej stronie kolonii był widoczny.
modyfikacja PDA
- Agar dekstrozy ziemniaczanej z TA (kwasem winowym): wykorzystuje do badania mikrobiologicznego żywności i produktów mlecznych.
- Agar dekstrozy ziemniaczanej z Chlortetracykliną: służy do mikrobiologicznego wyliczania drożdży i pleśni z kosmetyków.
- Agar dekstrozy ziemniaczanej z chloramfenikolem: wykorzystuje do selektywnej uprawy grzybów z mieszanych próbek.
zastosowania agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA)
- PDA wykorzystuje do wykrywania grzybów z produktów mlecznych, gotowych produktów spożywczych, a także próbek wody.
- wykorzystuje się również do uprawy grzybów (drożdży i pleśni) z okazów klinicznych.
- to medium ma również zastosowanie do ekspresji pigmentu, a także sporulacji.
- różne zmodyfikowane PDA i ich zastosowania są następujące-PDA z TA stosowane do badania mikrobiologicznego żywności i produktów mlecznych, podczas gdy PDA z chlortetracykliną stosuje się do mikrobiologicznego wyliczenia drożdży i pleśni z kosmetyków. PDA z chloramfenikolem stosuje się do selektywnej uprawy grzybów z próbek mieszanych.
- należy unikać podgrzewania podłoża po zakwaszeniu (włączenie kwasu winowego), ponieważ może to spowodować hydrolizę agaru, co może spowodować, że agar nie będzie mógł się zestalić.
- 4,0 g ekstraktu ziemniaczanego odpowiada 200 gm naparu ziemniaczanego.
- oryginalny agar dekstrozy ziemniaczanej nie tylko wspomaga wzrost grzybów, ale także niektórych kwaśnych bakterii i dlatego preferowane są jego modyfikacje.
- ilość chlortetracykliny 40,0 mg, chloramfenikolu 25,0 mg i kwasu winowego 1.4 gm można stosować w 1000 ml PDA w zmodyfikowanych formach dodatkowo.
kolejne odczyty na PDA
- Mikologia medyczna. Editors: Emmons and Binford, 2nd ed 1970, Publisher Lea and Febiger, Philadelphia.
- Rippon ’ s JW: Medical Microbiology. Patogennych grzybów i patogennych promieniowców. 3rd ed 1988 Wydawca WB Saunder co, Filadelfia.
- Clinical Microbiology Procedure Handbook, Chief in editor H. D. Isenberg, Albert Einstein College Of Medicine, New York, Publisher ASM (American Society for Microbiology), Washington DC.
- a Text-Book of Medical Mycology. Wydawca: Jagdish Chander. Wydawnictwo Mehata, Indie.
- Praktyczna Mikologia Laboratoryjna. Editors: Koneman E. W. and G. D. Roberts, 3rd ed 1985, Publisher Williams and Wilkins, Baltimore.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar