Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). PDA è raccomandato per l’isolamento e l’enumerazione di funghi (lieviti e muffe) da acqua, latticini, altri prodotti alimentari e persino campioni clinici ( scarti di pelle). La base nutrizionalmente ricca, l’infusione della patata incoraggia la sporulazione della muffa e la produzione del pigmento in alcuni dermatofiti (per esempio Trichophyton rubrum).
Principio di Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato dextrose agar (PDA) contiene infusi di patate disidratate e destrosio. L’infusione di patate fornisce una base nutritiva per la crescita rigogliosa della maggior parte dei funghi, mentre il destrosio funge da stimolante della crescita. L’agar nel mezzo agisce come agente solidificante. PDA ha ulteriormente modificato incorporando agenti come acido tartarico, cloramfenicolo e clortetraciclina. L’incorporazione di acido tartarico (TA) nel mezzo abbassa il pH a 3,5 che inibisce la crescita batterica. Il cloramfenicolo agisce come agente selettivo per inibire la crescita eccessiva batterica dei microrganismi concorrenti dai campioni misti mentre permette l’isolamento selettivo dei funghi. L’applicazione di clortetraciclina in PDA è per la valutazione di lieviti e muffe da prodotti cosmetici.
Composizione del Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato dextrose agar ( PDA), gli ingredienti e le loro quantità sono come segue-
Ingredienti Gms / Litro
- Patate, infusione da: 200.0
- Destrosio: 20.0
- Agar: 15.0
- acqua Distillata(D/W): 1000 ml
Finale di pH ( a 25°C) 5.6±0.2
Preparazione di Potato Dextrose Agar ( PDA)
- Sospendere 39.0 grammi potato dextrose agar ( PDA) in 1 litro depurata/acqua distillata o deionizzata.
- Riscaldare ad ebollizione per sciogliere completamente il mezzo.
- Sterilizzare in autoclave a 15 libbre di pressione (121°C) per 15 minuti.
- Dopo l’autoclave, lasciare raffreddare a 45-50°C.
- Nota: In lavori specifici, quando è richiesto pH 3,5, acidificare il terreno con acido tartarico sterile al 10%. La quantità di acido necessaria per 100 ml di mezzo sterile raffreddato è di circa 1 ml e non riscaldare nuovamente il mezzo dopo l’aggiunta dell’acido.
- Mescolare bene prima dell’erogazione.
- Versare l’agar di destrosio di patate in ogni piatto e lasciare le piastre sulla superficie sterile fino a quando l’agar non si è solidificato.
- Conservare le piastre in frigorifero a 2-8°C.
Conservazione e durata di conservazione dell’agar di destrosio di patate ( PDA)
- Conservare a 2-8ºC e lontano dalla luce diretta.
- I supporti non devono essere utilizzati se ci sono segni di deterioramento (restringimento, screpolature o scolorimento), contaminazione.
- Il prodotto è leggero e sensibile alla temperatura; protegge dalla luce, calore eccessivo, umidità e congelamento.
Requisiti di Prova
- campioni ( campioni o la crescita fungina)
- Inoculando loop
- bruciatore Bunsen
- Incubatore
- ceppi di Controllo (Candida albicans ATCC ® 10231 e Trichophyton rubrum
ATCC ® 28188)
procedura di Prova (campione/organismo di inoculazione)
- Consentire che le tavole calde a 37°C o a temperatura ambiente, e la superficie agar asciugare prima di inoculare.
- Prendere due piastre per un campione.
- Inoculare e striare il campione il prima possibile dopo la raccolta.
- Se il campione da coltivare è su un tampone, rotolare il tampone su una piccola area della superficie dell’agar.
- Striscia per l’isolamento con un anello sterile.
- Incubare una piastra aerobicamente a temperatura ambiente ( 20-25ºC) mentre un’altra 35-37ºC fino a 4 settimane ( a seconda del tipo di organismi sospetti)
- Esaminare le caratteristiche delle colonie.
Interpretazione dei risultati di PDA
- Ceppi di controllo quali Candida albicans ATCC ® 10231 (coltivatore rapido) e Trichophyton rubrum (coltivatore lento) ATCC ® 28188): Presenza di crescita
- Presenza di funghi nel campione: Presenza di crescita sul PDA
Caratteristiche della colonia di vari organismi nel PDA
Candida albicans: Crescita; colonie bianche lisce dopo 24-48 ore
Trichophyton rubrum: crescita osservata in 7 giorni e possono essere necessarie 3-4 settimane affinché il colore rosso sul retro della colonia sia visibile.
Modifica di PDA
- Agar di destrosio di patate con TA (acido tartarico): utilizza per l’esame microbico di alimenti e prodotti lattiero-caseari.
- Agar di destrosio di patate con clortetraciclina: utilizza è per l’enumerazione microbica di lieviti e muffe da cosmetici.
- Agar del destrosio della patata con il cloramfenicolo: Usa per la coltivazione selettiva dei funghi dai campioni misti.
Usi dell’agar del destrosio della patata (PDA)
- PDA utilizza per la rilevazione di funghi da prodotti lattiero-caseari, alimenti preparati e campioni di acqua.
- Utilizza anche per la coltivazione di funghi (lieviti e muffe) da campioni clinici.
- Questo mezzo è applicabile anche per l’espressione del pigmento e la sporulazione.
- Vari PDA modificati e le loro applicazioni sono le seguenti-PDA con TA utilizzato per l’esame microbico di alimenti e prodotti lattiero-caseari mentre PDA con clortetraciclina usi sono per l’enumerazione microbica di lieviti e muffe da cosmetici. PDA con cloramfenicolo utilizza per la coltivazione selettiva di funghi da campioni misti.
Keynote su PDA
- Il riscaldamento del terreno dopo l’acidificazione (incorporazione di acido tartarico) dovrebbe essere evitato in quanto potrebbe idrolizzare l’agar che può rendere l’agar incapace di solidificare.
- 4,0 g di estratto di patate equivalgono a 200 g di infuso di patate.
- L’originale agar di destrosio di patate non solo supporta la crescita di funghi ma anche di alcuni batteri acidi e quindi le sue modifiche sono preferite.
- La quantità di clortetraciclina 40,0 mg, cloramfenicolo 25,0 mg e acido tartarico 1.4 gm può utilizzare in 1000 ml di PDA in forme modificate in aggiunta.
Ulteriori letture su PDA
- Micologia medica. Editors: Emmons and Binford, 2nd ed 1970, Editore Lea and Febiger, Philadelphia.
- Rippon’s JW: Microbiologia medica. I funghi patogeni e gli actinomiceti patogeni. 3 ° ed 1988 Editore WB Saunder co, Philadelphia.
- Clinical Microbiology Procedure Handbook, Chief in editor H. D. Isenberg, Albert Einstein College of Medicine, New York, Editore ASM (American Society for Microbiology), Washington DC.
- Un libro di testo di micologia medica. Editore: Jagdish Chander. Pubblicazione Mehata, India.
- Laboratorio Pratico Micologia. Editors: Koneman E. W. e G. D. Roberts, 3rd ed 1985, Editore Williams e Wilkins, Baltimora.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar