Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). PDA se doporučuje pro izolaci a vyčíslení hub (kvasinek a plísní) z vody, mléčných výrobků, jiných potravinářských výrobků a dokonce i klinických vzorků ( kožní zbytky). Nutričně bohatá báze, bramborová infuze podporuje sporulaci plísní a produkci pigmentu v některých dermatofytech (např.
princip agaru bramborové dextrózy (PDA)
agar bramborové dextrózy (PDA) obsahuje dehydratované infuze brambor a dextrózu. Infuze brambor poskytuje živnou základnu pro bujný růst většiny hub, zatímco dextróza slouží jako stimulant růstu. Agar v médiu působí jako tuhnoucí činidlo. PDA dále modifikoval zahrnující činidla, jako je kyselina vinná, chloramfenikol a chlortetracyklin. Inkorporace kyseliny vinné (TA) do média snižuje pH na 3, 5, což inhibuje růst bakterií. Chloramfenikol působí jako selektivní činidlo, které inhibuje bakteriální přerůstání konkurenčních mikroorganismů ze smíšených vzorků a zároveň umožňuje selektivní izolaci hub. Aplikace chlortetracyklinu v PDA je určena k hodnocení kvasinek a plísní z kosmetických přípravků.
složení bramborového Dextrózového agaru (PDA)
bramborového dextrózového agaru ( PDA) složky a jejich množství jsou následující-
složky Gms / litr
- brambory, infuze z: 200,0
- dextróza: 20,0
- Agar: 15,0
- destilovaná voda(d/W): 1000 ml
konečné pH ( při 25°C) 5.6±0.2
Příprava bramborového Dextrózového agaru (PDA)
- Suspendujte 39,0 gramů bramborového dextrózového agaru (PDA) v 1 litru čištěné/destilované nebo deionizované vody.
- zahřejte k varu, aby se médium úplně rozpustilo.
- sterilizujte autoklávováním při tlaku 15 liber (121°C) po dobu 15 minut.
- po autoklávování nechte vychladnout na 45-50°C.
- Poznámka: Při specifické práci, je-li vyžadováno pH 3,5, okyselte médium sterilní 10% kyselinou vinnou. Množství kyseliny potřebné pro 100 ml sterilního, chlazeného média je přibližně 1 ml a po přidání kyseliny se médium znovu nezahřívá.
- před dávkováním dobře promíchejte.
- nalijte bramborový Dextrózový Agar do každé desky a nechte desky na sterilním povrchu, dokud agar neztuhne.
- desky uchovávejte v chladničce při 2-8°C.
skladování a Doba použitelnosti agaru bramborové dextrózy (PDA)
- Skladujte při 2-8ºC a mimo přímé světlo.
- média by se NEMĚLA používat, pokud se objeví známky poškození (smršťování ,praskání nebo změna barvy), kontaminace.
- výrobek je citlivý na světlo a teplotu; chrání před světlem, nadměrným teplem, vlhkostí a mrazem.
požadavky na zkoušky
- Zkušební vzorky (vzorky nebo růst hub)
- inokulační smyčka
- Bunsenův hořák
- inkubátor
- kontrolní kmeny (Candida albicans ATCC ® 10231 a Trichophyton rubrum
ATCC ® 28188)
zkušební postup (očkování vzorku / organismu)
- desky nechte zahřát na 37°C nebo na pokojovou teplotu a povrch agaru před naočkováním zaschnout.
- vezměte dvě desky pro jeden vzorek.
- vzorek naočkujte a pruhujte co nejdříve po odběru.
- pokud je vzorek, který má být kultivován, na tamponu, převalte tampon na malou plochu povrchu agaru.
- pruh pro izolaci sterilní smyčkou.
- inkubujte jednu destičku aerobně při pokojové teplotě (20-25ºC), zatímco další 35-37ºC až 4 týdny (v závislosti na typu podezřelých organismů)
- Zkoumejte vlastnosti kolonie.
interpretace výsledků PDA
- kontrolní kmeny tj. Candida albicans ATCC ® 10231 (rychlý pěstitel) a Trichophyton rubrum (pomalý pěstitel) ATCC ® 28188): Přítomnost růstu
- přítomnost hub ve vzorku: přítomnost růstu na PDA
charakteristika kolonie různých organismů v PDA
Candida albicans: růst; hladké bílé kolonie po 24-48 hodinách
Trichophyton rubrum: růst pozorovaný za 7 dní a může trvat 3-4 týdny, než bude viditelná červená barva na zadní straně kolonie.
modifikace PDA
- bramborový Dextrózový Agar S TA (kyselinou vinnou): používá se pro mikrobiální vyšetření potravin a mléčných výrobků.
- bramborový Dextrózový Agar s Chlortetracyklinem: používá se pro mikrobiální výčet kvasinek a plísní z kosmetiky.
- bramborový Dextrózový Agar s chloramfenikolem: používá se k selektivnímu pěstování hub ze smíšených vzorků.
použití bramborového Dextrózového agaru (PDA)
- PDA používá k detekci hub z mléčných výrobků, hotových potravin a vzorků vody.
- používá se také pro pěstování hub (kvasinek a plísní) z klinických vzorků.
- toto médium je také použitelné pro expresi pigmentu i pro sporulaci.
- různé modifikované PDA a jejich aplikace jsou následující-PDA s TA se používá pro mikrobiální vyšetření potravin a mléčných výrobků, zatímco PDA s chlortetracyklinem se používá pro mikrobiální výčet kvasinek a plísní z kosmetiky. PDA s chloramfenikolem se používá k selektivní kultivaci hub ze smíšených vzorků.
klíčové poznámky k PDA
- je třeba se vyhnout zahřívání média po okyselení (inkorporace kyseliny vinné), protože může agar hydrolyzovat, což může způsobit, že agar nebude schopen ztuhnout.
- 4,0 gm bramborového extraktu odpovídá 200 g bramborové infuze.
- původní bramborový dextrózový agar podporuje nejen růst hub, ale také některé kyselé bakterie, a proto jsou preferovány jeho modifikace.
- množství chlortetracyklinu 40,0 mg, chloramfenikolu 25,0 mg a kyseliny vinné 1.4 gm lze dodatečně použít v 1000 ml PDA v modifikovaných formách.
další údaje o PDA
- lékařská mykologie. Editoři: Emmons a Binford, 2nd ed 1970, Vydavatel Lea a Febiger, Philadelphia.
- Ripponova JW: Lékařská mikrobiologie. Patogenní houby a patogenní aktinomycety. 3rd ed 1988 Vydavatel WB Saunder co, Philadelphia.
- příručka klinických mikrobiologických postupů, šéfredaktor H. D. Isenberg, Albert Einstein College of Medicine, New York, Vydavatel ASM (americká společnost pro mikrobiologii), Washington DC.
- a Text-Book of Medical Mycology. Redaktor: Jagdish Chander. Publikace Mehata, Indie.
- Praktická Laboratorní Mykologie. Editoři: Koneman E. W. A G. D. Roberts, 3rd ed 1985, Vydavatel Williams and Wilkins, Baltimore.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar