Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). PDA wird zur Isolierung und Aufzählung von Pilzen (Hefen und Schimmelpilzen) aus Wasser, Milchprodukten, anderen Lebensmitteln und sogar klinischen Proben ( Hautabschürfungen) empfohlen. Die nährstoffreiche Basis, Kartoffelinfusion fördert Schimmelpilzsporulation und Pigmentproduktion in einigen Dermatophyten (z. B. Trichophyton rubrum).
Prinzip von Kartoffel Dextrose Agar (PDA)
Kartoffel dextrose agar (PDA) enthält dehydrierte Kartoffel infusionen und Dextrose. Kartoffelinfusion bietet eine Nährstoffbasis für das üppige Wachstum der meisten Pilze, während Dextrose als Wachstumsstimulans dient. Agar im Medium wirkt als Erstarrungsmittel. PDA hat weitere Wirkstoffe wie Weinsäure, Chloramphenicol und Chlortetracyclin modifiziert. Der Einbau von Weinsäure (TA) in das Medium senkt den pH-Wert auf 3,5, was das Bakterienwachstum hemmt. Chloramphenicol wirkt als selektives Mittel, um das bakterielle Überwachsen konkurrierender Mikroorganismen aus gemischten Proben zu hemmen und gleichzeitig die selektive Isolierung von Pilzen zu ermöglichen. Die Anwendung von Chlortetracyclin in PDA dient zur Bewertung von Hefen und Schimmelpilzen aus kosmetischen Produkten.
Zusammensetzung von Kartoffel Dextrose Agar (PDA)
Kartoffel Dextrose Agar (PDA) Zutaten und ihre Mengen sind wie folgt-
Zutaten Gms / Liter
- Kartoffeln, Infusion von: 200,0
- Dextrose: 20,0
- Agar: 15,0
- Destilliertes Wasser (D/ W): 1000 ml
End-pH-Wert (bei 25 ° C) 5.6±0.2
Herstellung von Kartoffel-Dextrose-Agar (PDA)
- Suspendieren Sie 39,0 Gramm Kartoffel-Dextrose-Agar ( PDA) in 1 Liter gereinigtem / destilliertem oder entionisiertem Wasser.
- Zum Sieden erhitzen, um das Medium vollständig aufzulösen.
- Sterilisieren durch Autoklavieren bei 15 lbs Druck (121 ° C) für 15 Minuten.
- Nach dem Autoklavieren auf 45-50°C abkühlen lassen.
- Hinweis: Bei bestimmten Arbeiten, wenn ein pH-Wert von 3,5 erforderlich ist, das Medium mit steriler 10% iger Weinsäure ansäuern. Die Menge an Säure, die für 100 ml steriles, gekühltes Medium benötigt wird, beträgt ungefähr 1 ml, und erhitzen Sie das Medium nach der Zugabe der Säure nicht erneut.
- Vor der Abgabe gut mischen.
- Gießen Sie Kartoffel-Dextrose-Agar in jede Platte und lassen Sie die Platten auf der sterilen Oberfläche, bis sich der Agar verfestigt hat.
- Lagern Sie die Platten im Kühlschrank bei 2-8 ° C.
Lagerung und Haltbarkeit von Kartoffel-Dextrose-Agar ( PDA)
- Bei 2-8ºC und vor direkter Sonneneinstrahlung schützen.
- Medien sollten nicht verwendet werden, wenn Anzeichen einer Verschlechterung (Schrumpfung, Rissbildung oder Verfärbung) oder Kontamination vorliegen.
- Das Produkt ist licht- und temperaturempfindlich; schützt vor Licht, übermäßiger Hitze, Feuchtigkeit und Einfrieren.
Prüfanforderungen
- Prüfkörper (Proben oder Pilzwachstum)
- Impfschleife
- Bunsenbrenner
- Inkubator
- Kontrollstämme (Candida albicans ATCC ® 10231 und Trichophyton rubrum
ATCC ® 28188)
Prüfverfahren (Probe/Organismus-Inokulation)
- Lassen Sie die Platten auf 37 ° C oder Raumtemperatur erwärmen und die Agaroberfläche vor dem Inokulieren trocknen.
- Nimm zwei Platten für eine Probe.
- Die Probe so bald wie möglich nach der Entnahme inokulieren und streuen.
- Wenn sich die zu kultivierende Probe auf einem Tupfer befindet, rollen Sie den Tupfer über einen kleinen Bereich der Agaroberfläche.
- Streifen zur Isolierung mit einer sterilen Schleife.
- Eine Platte aerob bei Raumtemperatur (20-25ºC)inkubieren, während eine weitere 35-37ºC bis zu 4 Wochen (abhängig von der Art der vermuteten Organismen)
- Kolonieeigenschaften untersuchen.
Ergebnisinterpretation von PDA
- Kontrollstämme d.h. Candida albicans ATCC ® 10231 ( Rapid grower) und Trichophyton rubrum ( slow grower) ATCC ® 28188): Vorhandensein von Wachstum
- Vorhandensein von Pilzen in der Probe: Vorhandensein von Wachstum auf PDA
Kolonieeigenschaften verschiedener Organismen in PDA
Candida albicans: Wachstum; glatte weiße Kolonien nach 24-48 Stunden
Trichophyton rubrum: Wachstum in 7 Tagen gesehen und es kann 3-4 Wochen dauern, bis die rote Farbe auf der Rückseite der Kolonie sichtbar ist.
Modifikation von PDA
- Kartoffel-Dextrose-Agar mit TA (Weinsäure): Wird zur mikrobiellen Untersuchung von Lebensmitteln und Milchprodukten verwendet.
- Kartoffel-Dextrose-Agar mit Chlortetracyclin: Es wird zur mikrobiellen Aufzählung von Hefen und Schimmelpilzen aus Kosmetika verwendet.
- Kartoffel-Dextrose-Agar mit Chloramphenicol: Wird zur selektiven Kultivierung von Pilzen aus gemischten Proben verwendet.
Verwendung von Kartoffel-Dextrose-Agar (PDA)
- PDA dient zum Nachweis von Pilzen aus Milchprodukten, Fertiggerichten sowie Wasserproben.
- Es wird auch zur Kultivierung von Pilzen (Hefen und Schimmelpilzen) aus klinischen Proben verwendet.
- Dieses Medium eignet sich auch für die Pigmentexpression sowie Sporulation.
- Verschiedene modifizierte PDAs und ihre Anwendungen sind wie folgt – PDA mit TA zur mikrobiellen Untersuchung von Lebensmitteln und Milchprodukten, während PDA mit Chlortetracyclin zur mikrobiellen Aufzählung von Hefen und Schimmelpilzen aus Kosmetika verwendet wird. PDA mit Chloramphenicol verwendet für die selektive Kultivierung von Pilzen aus gemischten Proben.
Keynotes zu PDA
- Das Erhitzen des Mediums nach dem Ansäuern (Einbau von Weinsäure) sollte vermieden werden, da es den Agar hydrolysieren kann, wodurch der Agar nicht mehr erstarren kann.
- 4,0 g Kartoffelextrakt entsprechen 200 g Kartoffelinfusion.
- Der ursprüngliche Kartoffel-Dextrose-Agar unterstützt nicht nur das Wachstum von Pilzen, sondern auch einige saure Bakterien und daher sind seine Modifikationen bevorzugt.
- Die Menge an Chlortetracyclin 40,0 mg, Chloramphenicol 25,0 mg und Weinsäure 1.4 gm kann in 1000 ml PDA in modifizierten Formen zusätzlich eingesetzt werden.
Weitere Informationen auf PDA
- Medizinische Mykologie. Herausgeber: Emmons und Binford, 2nd ed 1970, Herausgeber Lea und Febiger, Philadelphia.
- Rippon’s JW: Medizinische Mikrobiologie. Die pathogenen Pilze und die pathogenen Actinomyceten. 3rd ed 1988 Verlag WB Saunder co, Philadelphia.
- Clinical Microbiology Procedure Handbook, Chefredakteur H.D. Isenberg, Albert Einstein College of Medicine, New York, Herausgeber ASM (Amerikanische Gesellschaft für Mikrobiologie), Washington DC.
- Ein Lehrbuch der medizinischen Mykologie. Herausgeber: Jagdish Chander. Publikation Mehata, Indien.
- Praktische Labormykologie. Herausgeber: Koneman EW und GD Roberts, 3. Aufl. 1985, Verlag Williams und Wilkins, Baltimore.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar