Introduction of Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar ( PDA) is a fungal medium and its ingredients are clear from its name which contains potato ( vegetable), dextrose ( sugar), and agar ( solidifying agent). PDA: ta suositellaan sienten (hiivojen ja homeiden) eristämiseen ja laskemiseen vedestä, maitotuotteista, muista elintarvikkeista ja jopa kliinisistä näytteistä ( ihonpalasista). Ravitsemuksellisesti rikas pohja, peruna-infuusio edistää homeen itiöitymistä ja pigmenttituotantoa joillakin dermatofyyteillä (esim.Trichophyton rubrum).
Perunadekstroosiagarin (PDA) periaate
Perunadekstroosiagari (PDA) sisältää dehydratoituja peruna-infuusioita ja dekstroosia. Peruna-infuusio tarjoaa ravintopohjan useimpien sienten rehevälle kasvulle, kun taas dekstroosi toimii kasvua stimuloivana aineena. Väliaineen Agar toimii kiinteyttävänä aineena. PDA on edelleen muutettu sisältää aineita, kuten viinihappo, kloramfenikoli, ja klooritetrasykliini. Viinihapon (TA) lisääminen väliaineeseen alentaa pH: n arvoon 3,5, mikä estää bakteerien kasvua. Kloramfenikoli toimii selektiivisenä aineena, joka estää kilpailevien mikro-organismien bakteerien liikakasvua sekanäytteistä ja mahdollistaa samalla sienten selektiivisen eristämisen. Klooritetrasykliinin käyttö PDA: ssa on kosmeettisten valmisteiden hiivan ja homeen arviointia varten.
peruna-dekstroosi-agarin (PDA) koostumus
peruna-dekstroosi-agarin ( PDA) ainekset ja niiden määrät ovat seuraavat:
ainesosat GMS / l
- perunat, infuusio alkaen: 200.0
- dekstroosi: 20.0
- dekstroosi: 20.0
- agar: 15, 0
- tislattu vesi(d/w): 1000 ml
lopullinen pH ( 25°C: ssa) 5.6±0.2
Perunadekstroosiagarin valmistus (PDA ) )
- suspendoidaan 39,0 grammaa peruna dekstroosiagaria (PDA) 1 litraan puhdistettua/tislattua tai deionisoitua vettä.
- kuumenna kiehuvaksi, jotta väliaine liukenee kokonaan.
- steriloidaan autoklavoimalla 15 paunan paineessa (121°c) 15 minuutin ajan.
- autoklavoinnin jälkeen annetaan jäähtyä 45-50°C: seen.
- Huomautus: erityistyössä, kun vaaditaan pH 3, 5, liuos happamoidaan steriilillä 10-prosenttisella viinihapolla. 100 ml: aan steriiliä, jäähdytettyä väliainetta tarvitaan noin 1 ml happoa, eikä väliainetta saa lämmittää uudelleen hapon lisäämisen jälkeen.
- sekoita hyvin ennen annostelua.
- kaada Perunadekstroosiagaria jokaiselle lautaselle ja jätä lautasia steriilille pinnalle, kunnes agar on jähmettynyt.
- säilytä lautaset jääkaapissa 2-8°C: ssa.
Perunadekstroosiagarin säilyvyys ja säilyvyys (PDA ) )
- säilytä 2-8ºC suoralta valolta suojattuna.
- Väliainetta ei saa käyttää, jos on merkkejä pilaantumisesta (kutistuminen, halkeilu tai värjäytyminen), kontaminaatiosta.
- tuote on kevyt ja lämpötilaherkkä; suojaa valolta, liialliselta kuumuudelta, kosteudelta ja jäätymiseltä.
testivaatimukset
- testinäytteet ( näytteet tai sienikasvu)
- Inokuloiva silmukka
- Bunsenpolttaja
- inkubaattori
- Kontrollikannat (Candida albicans ATCC ® 10231 ja Trichophyton rubrum
ATCC ® 28188)
testimenettely (näytteen / organismin inokulaatio)
- levyjen annetaan lämmetä 37°C: ssa tai huoneenlämmössä ja agarin pinnan kuivua ennen inokulointia.
- ota kaksi lautasta yhtä näytettä varten.
- Inokuloi ja viiruta näyte mahdollisimman pian keräyksen jälkeen.
- jos viljeltävä näyte on vanupuikolla, pyyhkäise näyte pienelle alueelle agarin pinnasta.
- juova eristämistä varten steriilillä silmukalla.
- inkuboidaan yksi levy aerobisesti huoneenlämmössä ( 20-25ºC), kun taas toinen 35-37ºC enintään 4 viikon ajan ( epäillystä eliötyypistä riippuen)
- tutkitaan pesäkkeiden ominaisuuksia.
PDA: n
- Kontrollikantojen, kuten Candida albicans ATCC ® 10231 ( nopea viljelijä) ja Trichophyton rubrum ( hidas viljelijä) ATCC ® 28188, tulkinta: Kasvu
- sienten esiintyminen näytteessä: kasvu PDA: ssa
eri eliöiden pesäkkeet PDA: ssa
Candida albicans: kasvu; sileät valkoiset pesäkkeet 24-48 tunnin kuluttua
Trichophyton rubrum: kasvu nähty 7 päivässä ja punaisen värin näkyminen yhdyskunnan kääntöpuolella voi kestää 3-4 viikkoa.
Modification of PDA
- Potato Dekstrose Agar with TA (viinihappo): It uses for the microbial examination of food and dairy products.
- Perunadekstroosiagar, jossa on Klooritetrasykliiniä: sitä käytetään hiivan ja kosmetiikan homeen mikrobiluetteloon.
- Perunadekstroosiagar, jossa on kloramfenikolia: sitä käytetään sienten valikoivaan viljelyyn sekanäytteistä.
Perunadekstroosiagarin ( PDA) käyttötarkoitukset)
- PDA käyttää sienten havaitsemiseen maitotuotteista, valmisruoista sekä vesinäytteistä.
- sitä käytetään myös sienten (hiivojen ja homeiden) viljelyyn kliinisistä näytteistä.
- tätä väliainetta voidaan soveltaa myös pigmenttiekspressioon sekä sporulaatioon.
- erilaiset modifioidut kämmenmikrot ja niiden sovellukset ovat seuraavat: PDA: ta ja TA käytetään elintarvikkeiden ja maitotuotteiden mikrobitutkimukseen, kun taas PDA: ta käytetään klooritetrasykliinillä hiivan ja kosmetiikan homeen mikrobiluetteloon. PDA, jossa on kloramfenikolia, käytetään sienten valikoivaan viljelyyn sekanäytteistä.
PDA: n Päävihjeet
- elatusaineen kuumentamista happamoitumisen jälkeen (viinihapon lisääminen) on vältettävä, koska se voi hydrolysoida agarin, jolloin agar ei pääse jähmettymään.
- 4,0 g perunauutetta vastaa 200 g perunauutetta.
- alkuperäinen perunadekstroosiagari ei ainoastaan tue sienten kasvua, vaan myös joidenkin happamien bakteerien kasvua, joten sen muunnoksia suositaan.
- klooritetrasykliinin 40, 0 mg, kloramfenikolin 25, 0 mg ja viinihapon määrä 1.4 gm voi käyttää 1000 ml: ssa PDA: ta muunnetuissa muodoissa lisäksi.
LISÄLUKEMAT PDA: lla
- lääketieteellinen mykologia. Toimittaja: Emmons and Binford, 2nd ed 1970, Kustantaja Lea and Febiger, Philadelphia.
- Rippon ’ s JW: Medical Microbiology. Patogeeniset sienet ja patogeeniset Actinomycetes. 3rd ed 1988 Julkaisija WB Saunder co, Philadelphia.
- Clinical Microbiology Procedure Handbook, päätoimittaja H. D. Isenberg, Albert Einstein College of Medicine, New York, Kustantaja ASM (American Society for Microbiology), Washington DC.
- lääketieteellisen mykologian tekstikirja. Toimittaja: Jagdish Chander. Julkaisu Mehata, Intia.
- Käytännön Laboratoriomysologia. Toimittaja: Koneman E. W. and G. D. Roberts, 3rd ed 1985, Kustantaja Williams and Wilkins, Baltimore.
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PotatoDextroseAgar.htm
- http://himedialabs.com/TD/M096.pdf
- https://en.wikipedia.org/wiki/Potato_dextrose_agar